Die Studie wählte einen L-Isoleucin-auxotrophen Corynebacterium glutamicum-Stamm FA-1 aus, um die Transaminase zu untersuchen, die die Synthese vonL-Leucin und L-Valin. Die Studie schaltete zuerst das ilvE-Gen aus und stellte fest, dass nach dem Ausschalten des ilvE-Gens die L-Valin-Syntheseaktivität verloren ging, aber immer noch eine schwache L-Leucin-Synthesefähigkeit vorhanden war. Es zeigt, dass es andere Aminotransferasen gibt, die die Synthese von L-Leucin katalysieren. Anschließend wurde das aspB-Gen weiterhin ausgeknockt, und die Fähigkeit zur Synthese von L-Leucin ging vollständig verloren. Auf der Grundlage des Knock-outs von ilvE stellte die Überexpression des aspB-Gens die Synthese von L-Leucin zu einem gewissen Grad wieder her (Tabelle 1). Diese Ergebnisse zeigen, dass das von aspB kodierte Protein L-Leucin-Syntheseaktivität besitzt.
Darüber hinaus wurden in der Studie einige endogene und exogene Aminotransferase-Gene gescreent und diese Aminotransferase-Gene in ilvE- und aspB-Co-Knockout-Stämmen exprimiert, um zu untersuchen, ob diese Aminotransferasen eine Aktivität zur Synthese von verzweigtkettigen Aminosäuren aufweisen. Unter ihnen zeigt TyrB eine spezifische L-Leucin-Syntheseaktivität, während YbgE und CallvE duale Syntheseaktivitäten von L-Leucin und L-Valin zeigen. Diese Ergebnisse zeigen, dass die Optimierung der Transaminase zum Umschalten der Substratspezifität ein großes Potenzial hat, die Ausbeute an verzweigtkettigen Aminosäuren zu erhöhen.
